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草鱼呼肠孤病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法的建立

2013-01-15分类号:S943

【作者】张金凤  曾令兵  张辉  周勇  肖艺  苏岚  高正勇  
【部门】华中农业大学水产学院  中国水产科学研究院长江水产研究所  
【摘要】根据草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)衣壳蛋白VP6编码基因的序列设计特异性引物,以病毒全基因组RNA为模板,通过对反应条件进行优化,建立了GCRV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。检测结果表明,本方法可在63℃下1 h内实现靶片段的大量扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯型条带,反应体系中添加SYBR Green I荧光染料后,绿色阳性结果明显区别于橙色阴性结果。该检测体系针对草鱼呼肠孤病毒的检测灵敏度高,其最低检测限为33 pg,与常规RT-PCR方法相比较,灵敏度高10倍,且与斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(CCRV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱...
【关键词】草鱼出血病  呼肠孤病毒  逆转录环介导等温扩增  检测
【基金】国家现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(CARS-46-11)
【所属期刊栏目】中国水产科学
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