七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ成熟肽的克隆及原核表达与活性分析
2013-09-15分类号：S917.4
【部门】中国水产科学研究院黄海水产研究所 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 上海海洋大学水产与生命学院 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室
【摘要】应用RT-PCR方法扩增七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ(esIGF-Ⅰ)成熟肽序列。该成熟肽序列由210个碱基组成,编码70个氨基酸,包括B-C-A-D 4个结构域。将此成熟肽片段导入原核表达载体pET-28a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小为11 ku,在IPTG诱导后3 h表达量最高,占菌体总蛋白的51.8%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。对重组蛋白进行变性、纯化和复性,获得了纯化的重组蛋白。Western-blotting免疫印迹分析表明,融合蛋白可特异性地被6×His抗体识别。细胞增殖实验表明,纯化的IGF-Ⅰ...
【关键词】七带石斑鱼 类胰岛素生长因子-Ⅰ 成熟肽克隆 原核表达 生物活性分析
【基金】国家“八六三”高技术研究发展计划(2012AA10A413); 鲆鲽类现代产业技术体系(CARS-50); 中央级公益性事业单位基本科研业务费项目(20603022012022号); 山东省自然科学基金项目(ZR2012CQ025); 青岛市科技计划项目(11-1-1-11-hy)
【所属期刊栏目】水产学报
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