猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化
2013-10-28分类号：S852.65
【部门】江苏省农业科学院兽医研究所 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室 国家兽用生物制品工程技术研究中心 南京农业大学动物医学院 山东省蓬莱市村里集镇畜牧兽医工作站
【摘要】为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到原核表达载体pcoldI上,构建表达载体pcold-ORF1,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF1融合蛋白。并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定了pcold-ORF1重组蛋白表达的最佳表达条件。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白在BL21中高效表达,以包涵体形式表达...
【关键词】猪输血传播病毒2型 基因克隆 原核表达
【基金】国家基金面上项目(31272574); 江苏省自主创新专项(CX(11)2060)
【所属期刊栏目】华北农学报
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