猪日本乙型脑炎病毒NS5原核表达和多克隆抗体制备
2013-05-18分类号：S852.65
【部门】浙江农林大学动物科技学院
【摘要】提取猪日本乙型脑炎病毒(JEV)上海分离株的基因组RNA,反转录合成cDNA,扩增JEV-NS5基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-JEV-NS5,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组JEV-NS5蛋白,获得分子质量为103 ku的重组蛋白.该蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占总菌体蛋白的35%以上,His-band Ni+纯化后,获得高纯度重组蛋白占总蛋白的比例达75%以上.以纯化的蛋白免疫小鼠,制备小鼠抗JEV-NS5抗体,抗体效价达到3×104,并能与病毒感染的样本反应,证明该蛋白具有较好的特异性.
【关键词】日本乙型脑炎病毒 非结构蛋白NS5 原核表达 纯化
【基金】浙江省自然科学基金资助项目(Y3110124); 浙江农林大学人才启动基金项目(2010FR080)
【所属期刊栏目】福建农林大学学报(自然科学版)
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