奶牛瘤胃微生物元基因组文库中二肽基肽酶Ⅳ的筛选与分析
2013-04-16分类号：S852.6
【部门】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室 内蒙古民族大学动物科技学院
【摘要】【目的】研究奶牛瘤胃内参与蛋白质降解过程中二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidasesⅣ,DPP-Ⅳ)的序列特征和酶学性质。【方法】从奶牛瘤胃微生物Fosmid文库中挑选17 664个克隆,利用dpp-Ⅳ简并引物筛选含dpp-Ⅳ的阳性克隆。提取阳性克隆的质粒,用限制性内切酶HindⅢ进行酶切。PCR扩增含dpp-Ⅳ目的片段,并克隆测序。对阳性克隆的Fosmid末端进行测序。提取阳性克隆粗酶液,利用底物Gly-Pro-pNA检测肽酶活性。【结果】筛选后获得10个含有dpp-Ⅳ的阳性克隆(命名为DP1—DP10)。Fosmid末端序列经BLASTX比对后发现78%的序列可以与数据库的已...
【关键词】瘤胃微生物 Fosmid文库 二肽基肽酶Ⅳ 末端序列 酶活性
【基金】国家“973”计划项目(2011CB100804)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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