杨树炭疽病菌原生质体遗传转化的建立及绿色荧光蛋白的表达
2013-05-15分类号：S763.11
【部门】北京林业大学林学院省部共建森林培育与保护教育部重点实验室 河北秦皇岛经济技术开发区园林绿化管理处
【摘要】以杨树炭疽病菌菌株C1-5-2作为受体,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素B(hph)和GFP表达基因的质粒gGFP转入杨树炭疽病菌菌丝的原生质体中。幼嫩菌丝在0.7mol·L-1NaCl溶解的1% Lysing enzyme酶解液的作用下酶解210min可以得到108·mL-1的原生质体;在PEG介导下,通过含有潮霉素浓度为300μg·mL-1的PDA选择培养基筛选转化子,每微克DNA获得41个转化子的平均转化效率。对转化子进行PCR鉴定表明:hph基因和GFP基因已经整合到杨树炭疽病菌转化子基因组中,通过荧光显微镜观察到转化子可以发出清晰的绿色荧光,且转化子的潮霉素抗性和GFP表...
【关键词】杨树 炭疽菌 遗传转化 原生质体 绿色荧光蛋白
【基金】中央高校基本科研业务费(YX2011-20); 国家自然科学基金(C160901)
【所属期刊栏目】林业科学
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