实时荧光定量PCR检测猪源Mx1方法的建立及应用
2013-01-30分类号：S828
【部门】南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
【摘要】根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lg X+38.239 3(R2=0.998 5),灵敏度为1×102μL-1;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1的表达量最高(P<0.01),然后随着时间...
【关键词】猪源Mx1 实时荧光定量PCR 标准曲线
【基金】国家自然科学基金青年基金项目(31001062); 江苏高校优势学科建设工程资助项目
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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