褐色橘蚜中柑橘衰退病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
2013-02-01分类号：S436.66
【部门】西南大学园艺园林学院 中国农业科学院柑桔研究所
【摘要】【目的】建立SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,测定褐色橘蚜(Toxoptera citricida)中柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)含量。【方法】根据CTV CP25保守序列,设计特异性引物HD-F/R,通过优化得到最佳反应条件建立橘蚜中CTV实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性检验,评价该方法的可行性。应用该方法测定单头橘蚜中CTV含量。【结果】该实时荧光定量RT-PCR方法最低检测限为9.0拷贝/μL,其灵敏度是常规RT-PCR的100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关性系数为0.998,扩增效率达104....
【关键词】褐色橘蚜 柑橘衰退病毒 实时荧光定量RT-PCR
【基金】国家公益性行业(农业)科研专项(201203076-01); 教育部创新团队(IRT0976); 国家自然科学基金项目(30600419); 西南大学基本科研业务费(XDJK2009C133); 重庆市自然科学基金项目(CSTC2012JJA80036)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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