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伏马菌素B_1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

2013-09-30分类号:S133

【作者】王莹  顾舒舒  何成华  王玉伟  任喆  施志玉  赵士侠  张海彬  
【部门】南京农业大学动物医学院  
【摘要】从伏马菌素B1(FB1)杂交瘤细胞株F3中扩增出V H和V L基因片段,再经重叠延伸PCR(SOE-PCR)拼接扩增得到单链抗体(ScFv)基因,然后克隆到pCANTAB 5E噬菌粒载体上,转化感受态大肠杆菌TG1,并经辅助噬菌体M13K07超感染,构建FB1毒素噬菌体单链抗体库,ScFv基因插入率为100%,库容约为1.5×107,噬菌体的滴度为2.1×1015PFU·mL-1。免疫亲和筛选和富集后,经ELISA法最终筛选得到5株可分泌阳性噬菌体抗体的细菌。结论:伏马菌素B1噬菌体单链抗体库构建成功。
【关键词】伏马菌素B1  单链抗体  噬菌体抗体库
【基金】农业部948项目(2012-Z22); 教育部高等学校博士点基金项目(20110097110015); 国家自然科学基金项目(30901091); 中央高校基本科研业务费专项资金(0906J0397); 江苏省农业三项工程项目(SX(2010)268)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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