小麦TaNADP-ME1基因在大肠杆菌中的融合表达及可溶蛋白纯化
2013-04-28分类号:S512.1
【部门】中国科学院新疆理化技术研究所 中国科学院遗传与发育生物学研究所农业资源中心
【摘要】NADP依赖的苹果酸酶(NADP-ME)是C4光合途径关键酶。为了确定TaNADP-ME1基因的功能,利用重组技术将前期克隆到的TaNADP-ME1基因构建到原核表达载体pET32a,双酶切和PCR鉴定阳性克隆,CaCl2法转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导融合蛋白表达,Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析柱纯化融合蛋白。成功获得了重组原核表达载体pETE1,TaNADP-ME1基因在BL21(DE3)pLysS中得到了融合表达,SDS-PAGE表明,融合蛋白分子量为80 kDa,并成功纯化到融合蛋白。
【关键词】小麦 TaNADP-ME1基因 融合表达 蛋白纯化
【基金】国家“973”项目(2010CB951501); 中国科学院知识创新重要方向性项目(KSCX2-EW-N-02;KSCS2-EW-J-5); 中国科学院“西部博士资助项目”(XBBS200914); 新疆维吾尔自治区自然基金会项目(2011211B507)
【所属期刊栏目】华北农学报
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