斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因shRNA干扰载体的构建及效果评价
2012-03-15分类号：S941
【部门】中国水产科学研究院南海水产研究所农业部海水养殖生态与质量控制重点开放实验室 中国水产科学研究院长江水产研究所农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室 中国水产科学研究院长江水产研究所淡水生态与健康养殖重点开放实验室
【摘要】利用Invitrogen公司的在线生物学软件分析斜带石斑鱼神经坏死病毒CP基因,设计针对CP基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列[其结构特征为正链(19 nt)-环(4 nt)-负链(19 nt)]。化学合成这些序列,并退火连接为双链干扰片段,将双链干扰片段定向克隆到干扰载体pENTRTM/U6中,构建shRNA干扰载体pshRNA-124、pshRNA-896和pshRNA-NNV。然后,用脂质体转染法分别将3种shRNA干扰载体和pEGFP-CP基因共转染导入黑头呆鱼(FHM)肌肉细胞,荧光显微镜观察细胞荧光强度,分析荧光抑制效率,Real-...
【关键词】斜带石斑鱼 神经坏死病毒 CP基因 shRNA干扰载体
【基金】广东省海洋渔业科技推广专项项目(A201001H06); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2007TS02); 农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室开放课题(LFB20070610); 中国水产科学研究院淡水生态与健康养殖重点开放实验室开放课题(2007FEA0214)
【所属期刊栏目】水产学报
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