绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记效果
2012-05-15分类号：S917.4
【部门】南京农业大学无锡渔业学院 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 农业部淡水渔业种质资源利用重点实验室 南京农业大学动物科技学院
【摘要】以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行PCR扩增得到目的基因(Green fluorescence protein,GFP),然后加上酶切位点BamHI和NheI,构建pLenti6.3-IRES-EGFP载体,转染DH5α感受态细胞进行菌落PCR,取阳性进行酶切鉴定,再取呈阳性的质粒进行测序,使用浓度为1μg/μL的质粒与慢病毒表达载体进行连接,通过荧光显微镜观察到绿色荧光,表明本实验获得的GFP和慢病毒载体整合成功;用此转染293T细胞,通过荧光显微镜同样检测到了绿色荧光。使用建鲤的组织提取RNA,然后按照Fermentas公司的M-MLV操作说明书进行反转录,得到IGF2b基因后加酶切位点进行...
【关键词】绿色荧光蛋白 慢病毒载体 IGF2b 标记效果
【基金】现代农业产业技术体系建设专项(CARS-46); 国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAD01A1208); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2009JBFB01); 江苏省自然科学基金(BK2010146)
【所属期刊栏目】上海海洋大学学报
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