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禽呼肠孤病毒σNS和σC基因shRNA载体构建及其干扰效果测定

2012-04-28分类号:S852.65

【作者】熊文婕  谢芝勋  刘加波  庞耀姗  谢志勤  邓显文  谢丽基  
【部门】防城港市动物疫病预防控制中心  广西壮族自治区兽医研究所  
【摘要】禽呼肠孤病毒σC基因是病毒粘附蛋白,σNS基因具有结合单链RNA活性。根据siRNA靶序列设计原则,设计并合成siRNA模板并克隆到shRNA表达载体pSilencer-CMV 4.1 neo。分别构建了针对σC基因的shRNA载体C1、C2、C3和针对σNS基因的shRNA载体NS1、NS2、NS3。将构建的shRNA载体和阴性对照分别与表达σC和σNS基因的融合蛋白的真核表达载体pEGFP-σC及pEGFP-σNS共转染DF-1细胞。荧光显微镜观察结果表明,6个shRNA片段不同程度地抑制各自融合蛋白的表达。Real-time PCR检测结果表明,C3和NS1体外干扰病毒复制的效果最佳。
【关键词】禽呼肠孤病毒  shRNA  干扰
【基金】国家百千万人才工程入选专项资金项目(945200603); 广西特聘专家专项经费(2011B020); 广西自然科学基金项目(桂科自0991222); 广西留学回国人员基金项目(桂科回0639016)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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