小麦WPBF与高分子量谷蛋白基因上游Prolamin-Like box的特异结合
2012-01-01分类号：S512.1
【部门】西北农林科技大学生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室
【摘要】【目的】克隆普通小麦胚乳特异表达转录因子基因WPBF,对其原核表达条件进行优化,并验证其编码蛋白和小麦高分子量谷蛋白亚基基因(HMW-GS)上游Prolamin-Like box的结合特性,为小麦HMW-GS表达调控机制的阐明奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增得到WPBF编码区,将其连接到pET-21a-MBP载体中,并分别在E.coliT7 Express和Origami B(DE3)菌株中诱导表达。依次利用Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,最后通过凝胶迁移阻滞试验(EMSA)对重组蛋白的DNA结合特性进行分析。【结果】在33℃的Origami B(DE3)菌株中表达含...
【关键词】小麦 WPBF 表达纯化 HMW-GS Prolamin-Like box 凝胶迁移阻滞试验
【基金】国家转基因专项“高产转基因小麦新品种选育”(2008ZX08002-003); 中央高校基本科研业务费专项(QN2009070)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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