禾谷镰孢菌β_2-微管蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化
2012-03-16分类号：S482.2
【部门】南京农业大学植物保护学院/农业部作物病虫害监测及防控重点开发实验室 河南科技大学林学院
【摘要】【目的】在大肠杆菌中表达禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)的β2-微管蛋白,筛选使β2-微管蛋白可溶性表达的诱导因子,并对可溶性蛋白进行纯化。【方法】以构建好的质粒(pET32a+-β2-tubulin)为模板,PCR扩增出β2-微管蛋白基因,将其克隆到pET30a+表达载体上,并转化到表达宿主菌BL21(DE3)及Rossatta(DE3)pLysS,筛选阳性克隆,进行蛋白诱导表达,并筛选蛋白可溶性表达的诱导因子;对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot验证。【结果】获得了在大肠杆菌中表达效率高的阳性克隆;为了克服常规诱导条件下表达的β2-微管蛋白主要...
【关键词】禾谷镰孢菌 β2-微管蛋白 包涵体 可溶性表达 纯化
【基金】国家自然科学基金(30971891); 国家“973”计划项目(2009CB118906); 国家“863”计划项目(2008AA10Z414)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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