家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace在毕赤酵母GS115中的表达及其分析
2012-06-01分类号：Q78
【部门】广东省食品质量与安全重点实验室/华南农业大学食品质量与安全研究所 华南理工大学生物科学与工程学院 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所
【摘要】【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶(BmAChE)的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR及重叠延伸PCR去除原bmace中的信号肽和疏水肽,并对序列中存在的2个A+T富含区进行同义密码子替换的改造。将改造后的bmace与表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,以Ellman法测定酶活力,毒扁豆碱和有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组BmA...
【关键词】毕赤酵母 重组家蚕乙酰胆碱酯酶 表达 活性分析 有机磷农药 氨基甲酸酯类农药
【基金】国家自然科学基金(30871755,20877029); 广东省科技计划(2009A020101004)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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