IBV单链抗体的筛选及其互补决定区序列变异分析
2011-02-10分类号：S852.65
【部门】西北农林科技大学动物医学院 上海交通大学农业与生物学院上海市动物生物技术重点实验室 Raybiotech Inc.3607 Parkuay Lare Suite 200 Norcross GA USA30092
【摘要】【目的】筛选能表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单链抗体(scFv)的原核阳性克隆,并分析scFv抗原结合位点的氨基酸变化。【方法】采用RT-PCR,从IBV疫苗免疫的鸡脾脏RNA中扩增出抗体编码基因的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。利用重组链延伸反应(SOE-PCR),将linker与VH和VL基因相连构建鸡scFv基因,并将其克隆到原核表达载体pOPE101-XP中,构建重组质粒并转入大肠杆菌表达,间接ELISA筛选原核表达的抗IBVscFv的阳性克隆,对其测序后进行Clustal.W多序列比较,分析scFv骨架区(FR)和互补决定区(CDR)氨基酸序列差异。【结果】筛选到表达...
【关键词】鸡传染性支气管炎病毒 单链抗体 筛选 抗原互补决定区 序列分析
【基金】上海交通大学-Raybiotech联合抗体工程研究项目
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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