一种优化的大白菜线粒体DNA提取方法
2011-04-28分类号:S634.1
【部门】沈阳农业大学园艺学院 北京市农林科学院蔬菜研究中心
【摘要】介绍了一种快速、大量提取大白菜线粒体DNA的方法。以大白菜黄化苗为试验材料,通过加入一定量的DNaseⅠ和RNase A酶,充分消除核基因组DNA和RNA的污染。通过加入蛋白酶K和SDS,并经2步变温处理,即先在50℃条件下温育1 h,接着在37℃条件下温育1 h,有效地提高了mtDNA产出率。经凝胶电泳和PCR等检测,结果表明:mtDNA电泳条带清晰,OD260与OD280比值为1.8左右,纯度较高;利用细胞核看家基因Actin设计引物,扩增mtDNA,没有获得扩增产物,表明mtDNA中没有核基因组污染;利用大白菜CMS96胞质不育系基因orf222设计引物,扩增不育系和保持系mtDNA,仅...
【关键词】大白菜 线粒体DNA 提取方法 变温处理 细胞质雄性不育
【基金】国家自然科学基金(30871710); 北京市自然科学基金(6092009); 国家科技支撑项目(2009BADB8B03); 现代农业产业技术体系(CARS-25)
【所属期刊栏目】华北农学报
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