丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建
2011-07-10分类号：S567.53
【部门】西北农林科技大学生命科学学院 中国科学院水利部水土保持研究所 天津天士力现代中药资源有限公司
【摘要】【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western...
【关键词】丹参 肉桂酸-4-羟化酶 pET32a 原核表达载体
【基金】国家“十一五”科技支撑计划项目(2008BAD98B08-3)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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