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利用DNA shuffling技术构建含5个cry基因的突变体库以筛选高毒力杀虫蛋白

2011-02-15分类号:S476

【作者】张小琼  林拥军  
【部门】华中农业大学生命科学技术学院  
【摘要】以改造合成的5个Bt基因(cry1C*、cry2A*、cry1Ab、cry1Ac和cry9C*)为材料,利用DNAshuff-ling的体外分子进化技术构建1个含有1 000个重组基因克隆的大肠杆菌表达库;通过诱导表达重组蛋白,ELISA方法测定蛋白表达量,以棉铃虫(Helicoverpa armigera)为试验昆虫进行毒性试验。结果显示:重组克隆的蛋白毒性与阳性对照Cry1Ac相比,增强的有122个,持平的有38个,有毒性但毒性降低的有232个,失去毒性的有608个;对这1 000个重组克隆进行了测序,比较了重组基因与原始基因的序列同源性,除去55个克隆未能找到其原始基因来源,将其余的94...
【关键词】DNA shuffling  Cry蛋白  序列比较  突变体库
【基金】国家重大科技专项“抗虫转基因新品种培育”(2008ZX08001-001)
【所属期刊栏目】华中农业大学学报
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