EHEC O157:H7二重PCR的建立及应用
2011-12-28分类号：R440;S854.4
【部门】江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心 南京农业大学动物医学院
【摘要】建立用于从临床样品中检测EHEC O157:H7的二重PCR方法。根据GenBank登录EHEC O157:H7序列,通过对菌体和鞭毛抗原保守性核苷酸序列的比对和分析,分别设计编码O抗原rfbE基因和编码H抗原fliC基因各1对特异性引物,建立二重PCR检测方法,并以EHEC O157:H7纯培养和模拟制备的3种阳性样品为原材料,对方法的敏感性和特异性进行分析。运用成功建立的二重PCR,从带菌率最高的牛粪便中检测EHEC O157:H7,并进行菌株分离和鉴定。成功建立了rfbE与fliC的二重PCR方法,rfbE与fliC引物比例为2.5∶1,PCR循环参数中退火温度为56℃,扩增片段长度rf...
【关键词】O157:H7 二重PCR 方法建立 细菌分离 样品检测
【基金】国家“十一五”科技支撑计划(2007BAD40B01); 江苏省农业科技自主创新资金(cx(09)106); 江苏省农业科学院后备人才基金(6510804); 江苏省自然科学基金(BK2010068)
【所属期刊栏目】华北农学报
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