急性病毒性坏死病毒dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析
2011-09-15分类号：S944
【部门】中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 哥德堡大学
【摘要】根据已测定完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)基因组序列,设计特异性引物,以提取的发病扇贝组织总DNA为模板,PCR扩增得到编码AVNV dUTPase的开放阅读框ORF074,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建表达质粒pET32a-dut。然后,将其转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,诱导表达蛋白分子量约为46 ku,与预期表达蛋白大小一致。经Western-blotting及质谱分析鉴定,所表达蛋白即为重组dUTPase。表达产物经Co2+柱纯化后进行酶学活性测定。结果显...
【关键词】栉孔扇贝 dUTP焦磷酸酶 急性病毒性坏死病毒 原核表达 酶学活性
【基金】国家“八六三”高技术研究发展计划(2006AA100307); 现代农业产业技术体系建设专项资助(nycytx-47)
【所属期刊栏目】水产学报
文献传递
