【摘要】利用特异引物从基因组BAC文库筛选到1个35kb的片段,对该片段测序比对分析发现可能含有p26的复制区。为了验证该片段中是否含有p26的复制区,首先,将大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌穿梭载体pHT304用EcoRⅠ酶切切掉苏云金芽胞杆菌复制子后自连,获得复制子克隆载体pHT304E;随后,将12kbEcoRⅠ片段亚克隆到载体pHT304E上电转化无晶体突变株BMB171,获得具有抗性的转化子,证明该片段具有复制功能。缺失实验证明最小复制功能区包含2个必需的ORF。经过40代无抗培养,最小复制区复制稳定性达到90%以上。