尼罗罗非鱼免疫后外周血白细胞全长cDNA文库的构建及鉴定
2011-02-28分类号：S917.4
【部门】广西水产研究所
【摘要】为大规模快速克隆罗非鱼细胞免疫功能基因,采用SMART技术,构建了尼罗罗非鱼链球菌疫苗免疫后外周血白细胞全长cDNA文库。提取免疫后第3、5和7天外周血白细胞总RNA,用PowerscripTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得双链cDNA,经SfiI酶切和CHROMASPIN-400TM柱分级分离,收集500 bp以上的片段重组于改造的pBluescript II SK载体并转化大肠杆菌DH5α,测定文库滴度、重组率及库容量。结果表明,构建的cDNA文库原始库容量1.021×106克隆,文库滴度1.078×106pfu/mL,重组率94.71%,插入片段大小0.75~3....
【关键词】尼罗罗非鱼 外周血白细胞 全长cDNA文库 SMART技术
【基金】国家科技支撑计划项目(2008BADB9B04); 广西科学研究与技术开发计划项目(桂科基0836029); 2060302社会公益研究项目(2060302GXIF-2008-03,2060302GXIF-2009-04)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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