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福寿螺多功能纤维素酶基因egx的克隆及其体外功能性表达

2011-09-01分类号:Q78

【作者】黄妙容  刘德武  吴珍芳  
【部门】华南农业大学动物科学学院  
【摘要】【目的】克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx,并在大肠杆菌和哺乳动物细胞中进行表达分析。【方法】通过RT-PCR的方法,从福寿螺胃组织总RNA中克隆福寿螺多功能纤维素酶基因egx序列,连接克隆载体pMD18-T,再通过Eco RⅠ和NotⅠ两个酶切位点分别与表达载体pET-32a(+)及pcDNA3.1(+)连接,构建原核、真核表达载体,并在E.coli BL-21(DE3)和猪肾细胞PK15中进行表达,最后采用DNS法测定表达产物酶学活性。【结果】RT-PCR扩增得到1 326 bp的序列,包括1 185 bp的编码序列和部分侧翼序列,编码序列与已报道的福寿螺多功能纤维素酶基因cDNA序列相似...
【关键词】福寿螺  多功能纤维素酶  原核表达  真核表达  酶活测定
【基金】国家科技重大专项(2008ZX08006004,2009ZX08006-012B)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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