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甘蓝脯氨酸脱氢酶基因克隆与RNAi表达载体构建

2011-06-15分类号:S635.1

【作者】张娜  黄韫宇  冯洁  刘莉莎  杨鹏  赵冰  郭仰东  
【部门】中国农业大学农学与生物技术学院  
【摘要】通过RT-PCR、同源克隆和RACE等方法由甘蓝总RNA扩增得到了甘蓝脯氨酸脱氢酶基因cDNA全长(1 719 bp),其中包含了一个1 497 bp的完整开放阅读框,编码498个氨基酸,与已发表的十字花科植物ProDH基因均具有85%以上的同源性。在此基础上设计并克隆干扰片段,利用酶切连接的方法将该基因干扰片段正反向插入到载体pFGC-1008的GUS内含子两侧,经限制性内切酶酶切和测序鉴定,证明植物表达载体pFGC-gPDH已构建成功,为进一步研究该基因的功能创造了条件。
【关键词】甘蓝  ProDH基因  基因克隆  RNA干扰  载体构建
【基金】国家“973”计划项目(2009CB119000); 国家大学生创新性实验计划(20081001903); 中央高校基本科研业务费专项资金资助(2009-2-06)
【所属期刊栏目】中国农业大学学报
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