甘蓝型油菜根系可溶性蛋白的提取及双向电泳体系的优化
2011-04-15分类号:S565.4
【部门】华中农业大学作物遗传改良国家重点试验室/微量元素研究中心
【摘要】以甘蓝型油菜品种青油10号幼苗期根系为材料,采用三氯乙酸/丙酮沉淀法、酚提法及酚提取-甲醇/醋酸铵沉淀法分别提取甘蓝型油菜根系可溶性蛋白。以牛血清蛋白为标样,使用Bradford法测定蛋白质浓度,计算蛋白提取率,并对所提取的蛋白样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)检测,所得2-DE凝胶图片经PD Quest软件分析,分别检测得到644、645、669个蛋白点。对双向电泳条件进行优化,选择改进的酚提法提取蛋白,采用17 cm(pH 5~8)的IPG胶条、蛋白上样量150μg及10%的SDS-PAGE胶含量,可以获得分辨率高、重现性高的2-DE凝胶图片。
【关键词】甘蓝型油菜 根系 蛋白质提取 双向电泳
【基金】教育部高校博士点基金项目(0090146110006); 华中农业大学自主科技创新基金项目(2009SC008)
【所属期刊栏目】华中农业大学学报
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