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猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析

2010-01-08分类号:S852.7

【作者】刘振勇  吕志慧  郑亚东  窦永喜  乔军  骆学农  张艳  景志忠  才学鹏  
【部门】中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室  
【摘要】【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾...
【关键词】dUTP焦磷酸酶  猪囊尾蚴  原核表达  酶学活性
【基金】基本科研业务费专项资金(BRF070308); 国家科技支撑计划项目(2007BAD40B03)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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