SMART策略构建小黑杨茎形成层全长cDNA文库
2010-01-31分类号:S792.11
【部门】东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室
【摘要】为了研究小黑杨木材形成过程中的关键基因,以2年生小黑杨茎形成层组织为试验材料提取RNA,采用SMART(RNA转录过程中的5′末端转换机制)技术合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成双链cDNA。利用SfiⅠ限制性酶酶切后将其连接到质粒载体pDNR-LIB上,采用电穿孔法将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,构建全长cDNA文库。文库质量鉴定表明:原始文库滴度为2.18×106pfu/mL,扩增后的文库滴度为5.46×109pfu/mL,重组率为96%。插入片段长度在0.5~2.0kb之间,平均长度为1.12kb,表明构建的小黑杨茎形成层cDNA文库较为理想。
【关键词】小黑杨 形成层 SMART cDNA文库
【基金】黑龙江省重点攻关课题(GA06B301-4); 国家自然科学基金项目(30571513)
【所属期刊栏目】北京林业大学学报
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