棉花GhCOMT3基因的原核表达、纯化及鉴定
2010-08-28分类号：S562
【部门】新疆农业科学院核技术生物技术研究所
【摘要】为了深入研究GhCOMT3基因的功能,将GhCOMT3基因构建到原核表达载体pET-28a中,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。用0.2mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,结果发现,16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达;30℃诱导的蛋白表达量最大,之后对包涵体进行变性溶解,进行SDS-PAGE检测,再经过蛋白标记亲和层析柱(His TrapTMHP)纯化得到变性的pET-28a-GhCOMT3融合蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting检测纯化效果,鉴定表达产物,目的蛋白相对分子量约为39.119kDa,检测结果与预期一致。结...
【关键词】GhCOMT3 原核表达 蛋白纯化 Western blotting
【基金】国家“863”项目(2006AA10Z184); 农业部转基因重大专项课题(2009ZX08005-011B); 新疆自治区高技术研究发展计划项目(200611101); 国家自然科学基金项目(30660088)
【所属期刊栏目】华北农学报
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