普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析
2010-10-08分类号：S435.72
【部门】西南大学植物保护学院 中国科学院微生物研究所 中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心
【摘要】【目的】构建普通烟草铁氧还蛋白I(ferredoxin I,Fdn-Ⅰ)原核表达载体,表达可溶性Fdn-Ⅰ蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-Ⅰ在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况。【方法】以Fdn-Ⅰ全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-Ⅰ,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-Ⅰ与GST融合表达载体pEGX-Fdn-Ⅰ,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-Ⅰ可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-Ⅰ蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn...
【关键词】铁氧还蛋白Ⅰ 原核表达 抗体 番茄花叶病毒
【基金】国家自然科学基金(30900937); 中国博士后科学基金(20090450798); 中央高校基本科研业务费专项资金(XDJK2009B023)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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