人源弹性蛋白酶基因原核载体构建及表达
2010-10-15分类号：Q78
【部门】长春工业大学化学与生命科学学院 中国农业大学食品科学与营养工程学院
【摘要】从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中。然后用限制性内切酶BamH I和HindⅢ对重组质粒pGEM-T easy/ELA2B和大肠杆菌E.coli表达质粒pET30a进行双酶切,成功构建了原核表达载体pET30a/ELA2B。将重组质粒转化大肠杆菌表达宿主BL21中,通过PCR和表型鉴定表明,ELA2B基因已经整合到大肠杆菌BL21染色体上。用IPTG对重组的大肠杆菌BL21进行诱导表达,得到的蛋白经SDS-PAGE分析结果表明:菌体中含有一明显特异性蛋白,大小为28 kD。经包涵体复性后在弹性蛋白酶...
【关键词】人源弹性蛋白酶 大肠杆菌 基因克隆 蛋白表达
【基金】国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10Z440); 国家自然基金资助项目(30800770); 国家转基因生物重大专项资助项目(2008ZX08012-001)
【所属期刊栏目】沈阳农业大学学报
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