黑曲霉木聚糖酶基因xynA的克隆及真核表达载体的构建
2010-10-15分类号:Q78
【部门】华南农业大学动物科学学院 广东省温氏食品集团研究院
【摘要】从黑曲霉(Aspergillus niger)GI M3.452中克隆得到木聚糖酶基因xynA的成熟肽编码序列。通过重叠延伸PCR将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段和猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽进行拼接得到融合片段SPA,并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-SPA,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性,在脂质体介导下将重组质粒pcDNA-SPA转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测到木聚糖酶活性为7.6I U/mL。
【关键词】黑曲霉 木聚糖酶 xynA基因 真核表达
【基金】国家“863”项目(2008AA101008); 国家重大专项(2008ZX08006004;2009ZX08006-012B)资助
【所属期刊栏目】华中农业大学学报
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