一种大规模制备双链RNA的简单方法及其在斑节对虾中的应用
2010-07-15分类号：S917.4
【部门】中国水产科学研究院黄海水产研究所 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室 Center of Excellence for Shrimp Molecular Biology and Biotechnology Faculty of Science Mahidol University National Center for Genetic Engineering and Biotechnology(BIOTEC) National Science and Technology Development Agency(NSTDA)
【摘要】RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的方法。使用商业载体pGEMT和pDRIVE,以2步克隆法构建含有发夹环(hairpin loop)dsRNA表达载体,转化RNA酶Ⅲ缺陷的大肠杆菌HT115(DE3)进行体内转录制备dsRNA。构建的发夹RNA表达载体含有494bp的正向靶序列和403bp的反向互补靶序列,其中正向靶序列多出的91bp即可成为loop环,而无需再次克隆...
【关键词】斑节对虾 RNA干扰 双链RNA 体内转录 大肠杆菌HT115 kazal型蛋白激酶抑制剂
【基金】国家“九七三”项目(2006CB101801); 国家“八六三”高技术研究发展计划(2006AA100312); 泰国BIOTEC; 基本科研业务费专项经费(2060302/2)
【所属期刊栏目】水产学报
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