日本沼虾VASA蛋白的原核表达、抗体制备及其免疫鉴定
2010-10-15分类号：S917.4
【部门】上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室 上海市高校水产养殖学E-研究院 上海海洋大学水产与生命学院
【摘要】Vasa基因具有在性腺中特异表达的特点,在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用。从日本沼虾精巢cDNA中克隆了vasa基因的阅读框,连接到pET-32a载体,构建重组表达质粒pET32a-vasa,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导融合表达,表达产物经SDS-PAGE分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约85ku,表达量约占包涵体总蛋白的48.7%,Western-blotting检测表明,融合蛋白可特异地被anti-HIS标签抗体识别。用Ni2+-NTA纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备获得多克隆抗体,ELISA显示该抗体效价达1∶160000,Western免疫鉴定显示该抗体不仅能识...
【关键词】日本沼虾 VASA蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫鉴定
【基金】上海市浦江人才计划项目(08PJ1409000); 上海市科委自然科学基金项目(07JR14102); 上海市教委重点学科建设项目(J50701),上海市教委科研创新项目(08ZZ80)
【所属期刊栏目】水产学报
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