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高表达牛气管防御素的真核重组载体的构建及其鉴定

2010-12-28分类号:S852.5

【作者】高小艳  王长法  刘顺德  王洪梅  刘晓  何洪彬  
【部门】山东省农业科学院奶牛研究中心  宁夏大学农科院动物遗传育种与繁殖实验室  
【摘要】根据GeneBank中牛TAP的序列设计了1对特异性引物,采用RT-PCR方法从牛气管组织扩增牛TAP基因,并克隆到pEASY-T3载体。测序结果表明,扩增的片段含有144 bp核苷酸,编码48个氨基酸,与已报道的bTAP有1个氨基酸不同。该基因与真核表达载体FG9重组,经过PCR,酶切和测序鉴定,筛选牛TAP基因重组真核表达载体。使用脂质体法将FG9-TAP重组质粒转染293T细胞,斑点ELISA检测结果表明,成功构建了高表达牛TAP基因的真核表达载体,为抗金黄色葡萄球菌转牛TAP基因奶牛培育研究奠定基础。
【关键词】牛气管防御素  真核表达载体  基因表达
【基金】转基因重大专项(2008ZX08007-004,2009ZX08007-006B); 泰山学者海外特骋专家; 现代农业(奶牛)产业技术体系岗位科学家(Nycytx-10)现代农业(奶牛)产业技术体系岗位科学家(何洪彬); 国家自然科学基金(31072160); 山东省科技攻关课题(2009GG20002032); 济南市高校院所自主创新计划(201004027)
【所属期刊栏目】西南农业学报
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