克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4基因并稳定转染胎儿成纤维细胞
2010-11-08分类号:S827
【部门】内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室
【摘要】【目的】克隆内蒙古白绒山羊胸腺素β4(thymosinbeta4,Tβ4)基因,构建皮肤特异性表达载体,转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达红色荧光蛋白并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】通过RT-PCR克隆Tβ4基因cDNA序列,然后与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成Tβ皮肤特异性表达载体pCDsRed-KT。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】克隆了内蒙古白绒山羊Tβ4基因,cDNA全长142bp,其中包含135bp的完整...
【关键词】内蒙古白绒山羊 胸腺素β4 皮肤特异性表达载体 稳定转染
【基金】国家自然科学基金(30860191); 国家基础科学人才培养基金(J0730648); 转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划(2008ZX08008-002)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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