泉古菌Sulfolobus islandicus PCNA1的原核表达及其多克隆抗体的制备
2010-01-15分类号:Q78
【部门】华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室
【摘要】泉古菌Sulfolobus islandicus中PCNA有3个同源类似蛋白,本研究选取PCNA1作为研究对象,为获得可溶性表达的PCNA1蛋白,制备多克隆抗体,深入了解PCNA1基因的功能,将PCNA1基因片段克隆到组氨酸标签融合的表达载体pET30a中,利用IPTG诱导,金属螯合亲和层析进行纯化分析表明,融合蛋白大部分可溶。紫外分光光度法测定纯化蛋白的纯度可达90%以上,浓度约为2 mg/mL。免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗血清效价可达1∶10 000以上,Western印迹检测证明抗体特异性良好。
【关键词】泉古菌 PCNA1基因 原核表达 金属螯合亲和层析 多克隆抗体
【基金】科技部“973”计划项目(2003CB716004)资助
【所属期刊栏目】华中农业大学学报
文献传递