猪圆环病毒2型SYBR-Green 1实时荧光定量PCR检测方法的建立
2009-03-10分类号:S858.28
【部门】河南农业大学牧医工程学院 河南省动物性食品安全重点实验室
【摘要】【目的】建立一种能够快速、灵敏地检测猪圆环病毒2型(PCV2)的SYBR-Green 1实时荧光定量PCR方法。【方法】根据已报道的PCV2ORF2基因组序列,设计并合成1对引物。通过常规PCR扩增PCV2ORF2基因,将鉴定正确的ORF2基因片段克隆入pTG19-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-Green 1荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】PCV2荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线特异,相关系数为0.9988,最低检测的拷贝数为1拷贝/25μL,特异性...
【关键词】猪圆环病毒2型(PCV2) SYBR-Green1 实时定量PCR PCR检测方法
【基金】河南省杰出人才创新基金项目(0621002100)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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