重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达
2009-07-10分类号:S858.28
【部门】中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室
【摘要】【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血...
【关键词】猪囊尾蚴 AgB基因 重叠延伸PCR 真核表达 BHK-21
【基金】国家“863”计划项目(2006AA10A207); 国家科技支撑计划项目(2007BAD40B03)
【所属期刊栏目】中国农业科学
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