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猪Th1/Th2型细胞因子重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立

2009-08-28分类号:S828

【作者】温立斌  何孔旺  杨汉春  郭容利  李成仁  卢维彩  贾付从  
【部门】江苏省农业科学院兽医研究所  中国农业大学动物医学院  
【摘要】依据GenBank登录的猪Th1型细胞因子(IL-2、IL-12、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了上述因子的101 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了它们各自的标准曲线及直线回归方程。结果表明,该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点,为猪体内IL-2、IL-12I、FN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的mRNA水平的定量检测,提供了必要的技术手段。
【关键词】Th1/Th2型细胞因子  外周血单个核细胞  重组质粒  实时荧光定量PCR
【基金】国家“973”计划前期研究专项基金(2007CB116308); 江苏省自然科学基金(BK2008351)
【所属期刊栏目】华北农学报
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