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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建

2009-02-28分类号:S852.65

【作者】赵娜  田宏  吴锦艳  满自萍  尚佑军  何生虎  刘湘涛  
【部门】中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室  宁夏大学农学院  
【摘要】根据猪繁殖与呼吸综合症病毒已知序列(ch-1a,AY032626)设计包含完整ORF5序列的1对引物,采用RT-PCR方法扩增PRRSV甘肃LZH株的ORF5基因,将其克隆到杆状病毒载体pFastBacHTA上,经酶切鉴定、PCR鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBacHTA-ORF5,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBacHTA-ORF5转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组转座子rBacmid-ORF5;并成功构建了PRRSV LZH株ORF5基因的杆状病毒载体,为基因工程疫苗的研制奠定了基础。
【关键词】猪繁殖与呼吸综合征病毒  ORF5基因  克隆  杆状病毒表达
【基金】国家“十一五”高技术研究发展计划(“863”)项目(2006AA10A207)
【所属期刊栏目】华北农学报
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