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亚洲棉(Gossypium arboreum L.)全生育期均一化全长cDNA文库的构建和鉴定

2009-04-10分类号:S562

【作者】王玉荣  张雪妍  刘传亮  陈亚娟  李付广  
【部门】中国农业科学院棉花研究所/农业部棉花遗传改良重点实验室  天津科技大学食品工程与生物技术学院  
【摘要】【目的】构建二倍体亚洲棉石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库,建立亚洲棉功能基因组学研究基础平台,发掘亚洲棉发育、抗逆等相关基因。【方法】取石系亚1号子叶期、苗期、蕾期、花铃期不同组织器官,提取总RNA并分离纯化mRNA,采用SMART技术反转录全长双链cDNA。用DSN(duplex-specificnuclease)法对全长双链cDNA进行均一化,均一化的cDNA连接到λZAPⅡ载体,包装蛋白包装后构建石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库。【结果】初级文库滴度4×106pfu·ml-1,库容2×106个独立克隆,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.5kb。随机挑取192个克隆...
【关键词】亚洲棉  全生育期  均一化  cDNA文库  EST
【基金】国家十一五“863”计划(2006AA100105); 国家“948”项目[2006-G17(A)]
【所属期刊栏目】中国农业科学
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