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片球菌素基因的克隆及表达

2009-04-28分类号:Q78

【作者】韩烨  周志江  王培培  张丽霞  
【部门】天津大学农业与生物工程学院食品科学系  
【摘要】从乳酸片球菌中提取质粒DNA作为模板,根据GeneBank公布的细菌素结构基因,设计一对特异性引物,进行PCR扩增片段,将该片段定向克隆到pTA2载体,测序,与发表的基因序列比较,同源性为100%,然后克隆到表达载体Pet-28a,转化到Escherichia coli DH5α,经过卡那霉素平皿筛选,质粒酶切,PCR两步验证,获得阳性重组质粒,并转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳,显示在4 600 Da处出现条带,与已报道的细菌素分子量大小符合。表达产物对单核细胞增多症李氏杆菌有抗...
【关键词】乳酸片球菌  PCR  克隆  原核表达
【基金】国家自然科学基金项目(30507138)
【所属期刊栏目】华北农学报
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