基于TaqMan探针的猪细小病毒实时荧光定量PCR方法的建立
2008-12-15分类号：S854.43
【部门】河南农业大学牧医工程学院 河南省动物性食品安全重点实验室
【摘要】根据GenBank公布的猪细小病毒VP2基因序列,利用Premier express软件设计并合成了1对引物和1条相应的TaqMan探针,从猪细小病毒感染的PK-15细胞中提取DNA,经PCR扩增VP2基因,纯化的PCR产物克隆入pGEM-T Easy载体中,构建重组质粒.转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR标准品模板建立标准曲线.在25μL扩增反应体系中,对探针浓度、引物浓度、镁离子浓度和退火温度进行优化,建立了最佳的荧光定量PCR反应体系和扩增程序.该方法能够特异、定量检测猪细小病毒,灵敏度达1.12TCID50/mL.
【关键词】猪细小病毒 检测 实时荧光定量PCR
【基金】河南省杰出人才创新基金项目(0621002100)
【所属期刊栏目】湖南农业大学学报(自然科学版)
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