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不结球白菜L-半乳糖酸-1;4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建

2008-10-30分类号:S634

【作者】高红亮  李英  宋玉萍  马成英  侯喜林  
【部门】南京农业大学园艺学院/作物遗传与种质创新国家重点实验室  
【摘要】根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。
【关键词】不结球白菜  GLDH基因  RNAi植物双元表达载体
【基金】国家自然科学基金项目(30500343)
【所属期刊栏目】南京农业大学学报
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