萝卜DDRT-PCR技术体系的优化
2008-04-10分类号：S631.1
【部门】西北农林科技大学园艺学院陕西省农业分子生物学重点实验室 西北农林科技大学园艺学院陕西省农业分子生物学重点实验室 陕西杨凌712100 陕西杨凌712100
【摘要】【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8~2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求;确定的最佳DDRT-PCR反应体系(20μL)为:10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg2+2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mm...
【关键词】萝卜 RNA提取 DDRT-PCR 体系优化
【基金】国家“863”计划项目“植物分子与细胞高效育种技术与品种创制”(2006AA100108-4-7); 陕西省科技厅陕西省13115工程项目“优质多抗专用蔬菜新品种选用技术”(2007ZDKG-05)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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