春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化
2007-08-15分类号：S682.31
【部门】上海市农业科学院生物技术研究所 上海市农业科学院生物技术研究所 上海市农业科学院生物技术研究所 上海市农业科学院生物技术研究所 上海市农业科学院生物技术研究所 上海市农业科学院生物技术研究所 上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106 上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106 上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106 上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106 上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106 上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106
【摘要】以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化.结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA.电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要.同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μL反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol/LdNTPs,2.25mmol/LMg2+,1.0μmol/L引物,1.5ng/μL模板DNA.
【关键词】RAPD反应体系 DNA 分子标记分析 聚合酶 β-巯基乙醇 影响因素 中含
【基金】
【所属期刊栏目】湖南农业大学学报(自然科学版)
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