草胺膦抗性基因bar的原核表达与蛋白质纯化
2007-02-25分类号：Q78
【部门】西北农林科技大学农学院 中国农业科学院油料作物研究所 中国农业科学院油料作物研究所 中国农业科学院油料作物研究所 中国农业科学院油料作物研究所 杨凌职业技术学院生物工程系 西北农林科技大学农学院 陕西杨凌712100 中国农业科学院油料作物研究所 湖北武汉430062 湖北武汉430062 湖北武汉430062 湖北武汉430062 湖北武汉430062 陕西杨凌712100 陕西杨凌712100
【摘要】通过PCR扩增,从pCAMBIA1300-bar质粒中获得bar基因编码区全长,经酶切鉴定和测序后证实,bar基因分离成功。用BamH和Hind酶切,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组质粒pET28bar。将重组质粒pET28 bar转化大肠杆菌菌株BL21(DE3)后,获得高效表达。SDS-PAGE电泳分析显示,目的蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白质分子量约为27 ku。将包涵体离心、洗涤和纯化后,得到高纯度的目的蛋白。该蛋白可以替代植物外源蛋白进行转bar基因产品的食用安全性检测,也可用于转bar基因产品ELISA检测的抗体制备。
【关键词】抗除草剂基因bar 原核表达 蛋白纯化 转基因产品检测
【基金】农业部948项目“农业转基因生物及其产品安全检测技术;关键设备及相关材料的引进”(200522); 国家社会公益事业专项“转基因油菜转化特异性检测方法研究”(2005)
【所属期刊栏目】西北农林科技大学学报(自然科学版)
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