紫椴ISSR-PCR反应体系的建立与优化
2006-06-30分类号:S792.36;S897.1
【部门】东北林业大学 东北林业大学 东北林业大学 东北林业大学 哈尔滨150040 哈尔滨150040 哈尔滨150040 哈尔滨150040
【摘要】分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。2种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Taq酶1·0U,Mg2+2·0mmol·L-1,dNTP0·20mmol·L-1,引物0·4μmol·L-1,1×PCRbuffer,30ng模板DNA。在此基础上筛选出14个扩增...
【关键词】紫椴 ISSR-PCR 正交设计 单因子试验 梯度PCR
【基金】国家林业局野生动植物保护基金资助项目“紫椴保护与救护”(010413256)。
【所属期刊栏目】林业科学
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